Страница 1 2 3 4 5 6

всего страниц: 6

ПОГЛОЩЕНИЕ СВЕТА

Согласно основному закону фотохимии, который является следствием закона сохранения энергии, фотохимическое действие может оказывать только тот свет, который поглощается данной системой. Тот свет, который не поглощается данной системой, фотохимических реакций вызывать не будет. Поэтому для рассмотрения энергетики фотобиологического процесса необходимо знать поглощательную способность системы. В этом отношении наиболее существенны два фактора:

1. общее количество поглощаемой энергии или число квантов, поглощаемых в единицу времени (первый фактор). Этот показатель обычно оценивается с помощью оптической плотности объекта;
2. величина поглощаемого кванта (второй фактор)

Первый фактор определяет возможное число реакций, совершающихся в единицу времени, т. е. скорость процесса. Второй фактор определяет энергетику самой фотореакции, т. е. определяет, какая реакция возможна.

Поток световых квантов, проходя через систему, содержащую молекулы вещества, ослабляется. Ослабление потока квантов происходит вследствие того, что часть квантов поглощается (захватывается) молекулами.

Пусть I - интенсивность светового потока, т. е. количество квантов, проходящих через данный образец в единицу времени. Ослабление интенсивности света dI будет зависеть от количества столкновений квантов с молекулами вещества. Очевидно, что число этих столкновений пропорционально числу молекул на пути светового потока, т. е. пропорционально концентрации С вещества. С другой стороны, оно должно быть также пропорционально количеству самих квантов, проходящих через систему в единицу времени, т. е. интенсивности светового потока I. Если взять достаточно малое расстояние dl, на котором происходит поглощение, то ослабление интенсивности потока dI будет пропорционально этому расстоянию. Установленные зависимости можно выразить уравнением: - dI = k · I · C · dl, (3) где k - коэффициент пропорциональности; знак "минус" перед dI показывает, что световой поток уменьшается. Уравнение (3) представляет собой линейное дифференциальное уравнение первого порядка. Запишем его в следующем виде: - dI / I = k · C · dl Проинтегрировав левую и правую части, получим: - lnI = k · C · l=B, где l - толщина образца (длина оптического пути); В - константа интегрирования, которую необходимо определить. Пусть l = 0, тогда В = -lnIо, где Iо - интенсивность потока, входящего в вещество. Подставляя значение В в предыдущее уравнение, получаем: lnIо - lnI = k · C · l, или lnIо/ I = k · C · l (4) Отсюда I = Iо e- kCl, (5) где е - основание натуральных логарифмов. Уравнения (4) и (5) являются выражением закона Ламберта-Бера: интенсивность светового потока, проходящего через вещество, экспоненциально уменьшается в зависимости от длины оптического пути и концентрации вещества в образце. В уравнении (4) заменим натуральный логарифм на десятичный и новый коэффициент пропорциональности обозначим ε. Тогда lg Io/ I = ε · C · l (6) Десятичный логарифм отношения интенсивности падающего света к интенсивности выходящего из образца, света называется оптической плотностью. Обозначив ее через D, получим: lg Io/ I = D = ε · C · l (7) В этом случае закон Ламберта - Бера можно сформулировать следующим образом: оптическая плотность образца прямо пропорциональна концентрации вещества в образце и длине светового пути. В уравнении (7) ε называется молярным коэффициентом поглощения. Если l=1 и С=1, то ε=D, т. е. - это оптическая плотность образца толщиной в одну единицу (1 см) при концентрации вещества 1 моль/л. Оптическая плотность показывает поглощательную способность вещества. Поглощение тем больше, чем больше отношение Io/ I, т. е. чем больше оптическая плотность.

Вещество неодинаково поглощает свет различной длины волны. Кривая зависимости оптической плотности вещества от длины волны поглощаемого света называется спектром поглощения.

Обычно спектры поглощения молекул имеют непрерывный характер, но обнаруживают максимумы на той длине волны света, где имеется максимальное поглощение квантов света. На рис.1. приведены спектры поглощения некоторых биологически важных соединений, поглощающих свет в видимой и ультрафиолетовой областях солнечного спектра. Белки имеют максимум поглощения на длине волны 280 нм, нуклеиновые кислоты - в области 260 нм, родопсин - 500 нм, хлорофилл а имеет два максимума поглощения: 430 и 680 нм.

Как видно из рисунка, спектры поглощения имеют иногда довольно сложный вид, характерный для данного вещества и зависящий от структуры и свойств молекул данного вещества.

Изучение спектров поглощения какого-либо фотобиологического процесса позволяет выяснить, какое вещество ответственно в данном процессе за поглощение света. Это достигается в результате сравнения спектров исследуемого процесса и спектров известных веществ. Кроме этого, по положению максимумов на шкале длин волн можно определить длину волны света, преимущественно поглощаемого этим веществом.

Знание длины волны поглощаемого света позволяет определить энергию поглощаемых квантов. А по величине энергии поглощаемых квантов можно рассчитывать расположение электронных и колебательных энергетических уровней молекулы, а также переходы молекул из одного энергетического состояния в другое.

Кроме всей этой информации, величина оптической плотности дает сведения о концентрации вещества в исследуемой пробе. По величине максимумов поглощения на основании уравнения (7) можно делать заключения о концентрации вещества в исследуемом объекте.

Метод исследования фотобиологических процессов с помощью спектров поглощения называется абсорбционной спектрофотометрией. Спектры поглощения получают с помощью специальных приборов - спектрофотометров. На рис. 2 изображена схема строения спектрофотометра.

Свет от источника света Л попадает в монохроматор М, который дает излучение строго определенной длины волны. Из монохроматора свет попадает в кювету К с раствором исследуемого вещества.

Из кюветы ослабленный поток квантов направляется в ФЭУ - фотоэлектронный умножитель, который преобразовывает энергию квантов в электрическую энергию и усиливает ее. В некоторых случаях вместо ФЭУ может быть использован обыкновенный фотоэлемент с усилителем.

От ФЭУ электрический ток поступает на регистрирующее устройство Г, прокалиброванное в единицах оптической плотности. Им может быть гальванометр или самописец.

Поворачивая ручку монохроматора, на объект посылают свет различной длины волны и с регистрирующего устройства снимают показания.

В современных спектрофотометрах спектр монохроматора развертывается автоматически и также автоматически записываются показания на движущейся ленте самописца. В этом случае кювету с раствором ставят в камеру, включают прибор и получают готовую кривую - спектр поглощения.

Страница 1 2 3 4 5 6

всего страниц: 6