kub
Островок  здоровья

----
  
записная книжка врача акушера-гинеколога Маркун Татьяны Андреевны
----
 
 
 

Пренатальная диагностика генных болезней

Страница 1 2 3 всего страниц: 3

Общие представления

На долю генных (моногенных) нарушений приходится в общей сложности до 5% всей врожденной патологии. Это так называемый генетический груз популяции [7]. Из них на собственно моногенные болезни приходится около 1%; 3-3,5% составляют заболевания с выраженной наследственной предрасположенностью (диабет, атеросклероз, многие онкологические заболевания).

Для ПД, в первую очередь, представляют интерес генные болезни, приводящие к тяжелой, нередко смертельной патологии, в отношении которых пока отсутствуют или все еще малодоступны методы лекарственной терапии. Из более 6000 заболеваний, известных на сегодняшний день, доля заболеваний, безусловно заслуживающих ПД, составляет не более 1% [25]. Причем и в этой группе удельный вес различных нозологии существенно варьирует. Большая часть моногенной патологии, требующей ПД,- такие сравнительно частые и тяжелые болезни, как муковисцидоз, миодистрофия Дюшенна, синдром ломкой (фрагильной) Х-хромосомы, гемофилия А, фенилкетонурия, поликистоз почек, атаксия Фридрейха, синдром Верднига-Гоффмана, синдром Шарко-Мари-Туc. ПД именно этих социально значимых моногенных заболеваний является особенно актуальной.

Впервые пренатальная молекулярная диагностика (ДНК-диагностика) в России проведена в Санкт-Петербурге в 1987 г. женщине высокого риска рождения ребенка с муковисцидозом [11]. К настоящему времени в стране осуществлено около 1000 ПД моногенных болезней [18], из которых более 500 выполнено в нашем Центре. Это позволило предотвратить рождение 200 детей с тяжелыми моногенными болезнями, в т. ч. с муковисцидозом, фенилкетонурией, гемофилиями А и В, миодистрофией Дюшенна, синдромом ломкой Х-хромосомы и др. [12]. Список генетических Центров страны, где проводится ДНК-диагностика наиболее частых моногенных болезней, приведен в табл. 14.4.

Меры повышения эффективности пренатальной диагностики генных болезней

Принимая во внимание высокую точность современных молекулярных методов, их большую чувствительность и, к сожалению, достаточно высокую себестоимость, необходимо помнить, что эффективность ДНК-диагностики у плода в значительной мере предопределяется соблюдением следующих основных требований:

  • Точностью клинического диагноза у пробанда [показать] .
  • Своевременным обследованием семьи высокого риска и больного молекулярными методами [показать] .
  • Правильностью оценки риска рождения больного ребенка [показать] .
  • Выбором оптимального срока ПД [показать] .
  • Возможностью получения материала плода для ПД генных болезней [показать] .
  • Четкостью рекомендаций после молекулярной пренатальной диагностики [показать] .
  • Наличием скринирующих программ в ДНК-диагностике [показать] .

Основные подходы в пренатальной диагностике генных болезней ДНК-методами

Отличительной чертой молекулярной диагностики является ее универсальность. Это означает, что диагностика может проводиться на любой стадии онтогенеза, в т. ч. до рождения, и материалом для ДНК-анализа могут быть любые клетки и ткани плода.

В настоящее время в ПД, равно как и во всякой другой диагностике генных болезней, существуют два основных подхода:

  • прямая диагностики, основанная на непосредственной идентификации мутаций в определенном гене;
  • косвенная (непрямая) диагностика, в основе которой лежит маркирование мутантного гена (иногда называемая маркированием хромосомы, несущей мутантный ген) с помощью молекулярных маркеров.

Рассмотрим кратко эти подходы.

Прямая диагностика

Основу прямой диагностики составляет идентификация мутаций в самом гене. Преимущества метода:

  1. высокая (приближающаяся к 100%) точность диагностики;
  2. возможность ПД, анализа информативности (пригодности для молекулярной диагностики) семьи и выявление гетерозиготных носителей при отсутствии больного ребенка.

Недостаток метода - отсутствие сведений о мажорных мутациях генов некоторых заболеваний, требующее, зачастую, достаточно детального молекулярного сканирования его первичной структуры с целью обнаружения мутаций. Более подробно алгоритмы молекулярной диагностики различных моногенных болезней приведены в главе "Медицинская лабораторная диагностика наследственных болезней" и в специальной литературе [9].

Косвенная диагностика

Непрямой (косвенный) подход в молекулярной диагностике исторически более ранний и более универсальный. Он основан на анализе внутри- и внесенных полиморфных сайтов (см. "Медицинская лабораторная диагностика наследственных болезней"). Непременным условием проведения косвенной ДНК-диагностики является наличие в семье больного ребенка или возможность исследования его ДНК (сохранившихся пятен крови, гистологических препаратов в случае его гибели) для установления информативности семьи.

Установление информативности предусматривает выявление такого полиморфного сайта, который может быть использован в качестве молекулярного маркера как мутантного, так и нормального аллеля. При этом в случае aутосомно-рецессивных заболеваний родители больного будут определяться как гетерозиготы по данному полиморфизму, а больной будет гомозиготой по одному из маркерных аллелей. Именно гетерозиготность по молекулярным полиморфизмам определяет информативность той или иной семьи высокого риска рождения ребенка с генной патологией. В зависимости от типа полиморфизма (подробнее см. "Медицинская лабораторная диагностика наследственных болезней"), гетерозиготность и соответственно информативность семьи варьирует от 50 до 90%.

В зависимости от распределения маркерных аллелей на гомологичных хромосомах больного и его родителей семья может быть полностью или частично информативной, или неинформативной (рис. 13.8).

Принципиально важно проанализировать в семье высокого риска такое количество полиморфных сайтов одного гена, чтобы точно определить, с каким конкретным аллелем наследуется мутантный ген и, таким образом, сделать семью полностью информативной для последующей ПД. Решающее преимущестио косвенного метода - возможность ДНК-диагностики без точной идентификации мутации в самом гене и даже при отсутствии данных о точной идентификации и клонировании самого мутантного гена. Существенными недостатками являются:

  • невозможность диагностики при отсутствии больного ребенка (нельзя точно определить, с каким полиморфным аллелем сцеплен мутантный ген);
  • возможность ошибки диагноза, обусловленная переносом полиморфного сайта на "здоровый" аллель вследствие кроссинговера.

Точность молекулярной диагностики, возможные источники ошибок

В ПД молекулярными методами важно учитывать два основных источника ошибок:

  1. Контаминация плодного образца материнскими клетками.
  2. Возможность кроссинговера при использовании непрямого метода.

Учитывая крайне высокую чувствительность метода ПЦР, избежать загрязнения образцов плодных тканей материнскими клетками можно только путем тщательного отбора ворсинок хориона или плаценты под бинокулярной лупой с последующим отмыванием физиологическим раствором. Особенно важно не допустить попадания материнской крови в образец пуповинной крови плода при получении материала методом кордоцентеза. Высокий уровень оператора и использование качественных реакций на выявление примеси материнской крови позволяют избежать этого осложнения.

Риск диагностических ошибок при проведении ПЦР может быть значительно уменьшен путем работы в стерильных лабораторных условиях.

Достоверность молекулярной диагностики прямым методом, т.е. путем идентификации мутаций в самом гене, очень высока и приближается к абсолютной. Несмотря на такую точность, учитывая все многообразие возможных изменений в геноме при созревании гамет (кроссинговер) и на начальных стадиях эмбриогенеза (мутагенный эффект), вернее полагать, что точность прямой диагностики составляет 99,9%.

Значительно сложнее оценка результатов молекулярной диагностики косвенным методом. В случае учета внутригенных полиморфизмов точность непрямой диагностики достаточно высока, т.к. величина внутригенного кроссинговера, как правило, не превышает 0,1 % для большинства известных генов. Исключение могут составлять только сравнительно крупные гены, такие как ген дистрофина, гемофилии A, нейрофиброматоза и некоторые другие. Так, в случае дистрофина ошибка диагноза может достигать 2%, что соответствует высокой частоте внутригенного кроссинговера (около 2%) в этом гигантском гене (2,2 млн п. о.). Важно также учитывать степень родства больного и пробанда, у которого проводится ПД. Величина возможной ошибки возрастает, если маркерный аллель определяется не у сибса плода, а у других его родственников.

Особенно осторожно следует оценивать результаты непрямой диагностики с использованием внегенных полиморфных локусов. Считается, что с уверенностью проводить ПД в этих случаях можно только при одновременном тестировании нескольких полиморфных сайтов, фланкирующих мутантный ген. Обычно для молекулярной диагностики используют маркеры, частота рекомбинаций которых с мутантными аллелями гена не превышает десятых или сотых долей процента.

Характеристика ДНК-полиморфизмов, последовательности праймеров для ПЦР, величины погрешности непрямых методов для различных заболеваний, диагностируемых пренатально, приведены в монографии В.Н.Горбуновой и В.С.Баранова [9].

Комбинированная диагностика

В ряде случаев (частичная информативность) ДНК-диагностика некоторых заболеваний может быть дополнена другими диагностическими исследованиями (рис. 13.9). При муковисцидозе дополнительная информация о состоянии плода может быть получена путем биохимического исследования активности ферментов микроворсинок кишечника плода в амниотической жидкости на 17-19 неделях беременности. Разработанный и широко применяемый в нашей лаборатории алгоритм ПД муковисцидоза приведен на рис. 13.10.

В случае гемофилии А возможно прямое определение уровня фактора VIII свертывания крови в пуповинной крови плода после 20-й недели беременности.

ДНК-диагностика адреногенитального синдрома может быть дополнена прямым исследованием содержания 17-ОН прогестерона в амниотической жидкости.

ПД синдрома ломкой Х-хромосомы нередко дополняют прямым цитогенетическим анализом культуры лимфоцитов пуповинной крови плода, а в случае неинформативности ДНК-диагностики при миодистрофии Дюшенна принципиально возможен иммуноцитохимический анализ биоптата скелетных мышц плода.

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

Страница 1 2 3 всего страниц: 3

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001


 
 

Куда пойти учиться



 

Виртуальные консультации

На нашем форуме вы можете задать вопросы о проблемах своего здоровья, получить поддержку и бесплатную профессиональную рекомендацию специалиста, найти новых знакомых и поговорить на волнующие вас темы. Это позволит вам сделать собственный выбор на основании полученных фактов.

Медицинский форум КОМПАС ЗДОРОВЬЯ

Обратите внимание! Диагностика и лечение виртуально не проводятся! Обсуждаются только возможные пути сохранения вашего здоровья.

Подробнее см. Правила форума  

Последние сообщения



Реальные консультации


Реальный консультативный прием ограничен.

Ранее обращавшиеся пациенты могут найти меня по известным им реквизитам.

Заметки на полях


навязывание услуг компании Билайн, воровство компании Билайн

Нажми на картинку -
узнай подробности!

Новости сайта

Ссылки на внешние страницы

20.05.12

Уважаемые пользователи!

Просьба сообщать о неработающих ссылках на внешние страницы, включая ссылки, не выводящие прямо на нужный материал, запрашивающие оплату, требующие личные данные и т.д. Для оперативности вы можете сделать это через форму отзыва, размещенную на каждой странице.
Ссылки будут заменены на рабочие или удалены.

Тема от 05.09.08 актуальна!

Остался неоцифрованным 3-й том МКБ. Желающие оказать помощь могут заявить об этом на нашем форуме

05.09.08
В настоящее время на сайте готовится полная HTML-версия МКБ-10 - Международной классификации болезней, 10-я редакция.

Желающие принять участие могут заявить об этом на нашем форуме

25.04.08
Уведомления об изменениях на сайте можно получить через раздел форума "Компас здоровья" - Библиотека сайта "Островок здоровья"

Островок здоровья

 
----
Чтобы сообщить об ошибке на данной странице, выделите текст мышью и нажмите Ctrl+Enter.
Выделенный текст будет отправлен редактору сайта.
----
 
Информация, представленная на данном сайте, предназначена исключительно для образовательных и научных целей,
не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения, и не может служить заменой очной консультации врача.
Администрация сайта не несёт ответственности за результаты, полученные в ходе самолечения с использованием справочного материала сайта
Перепечатка материалов сайта разрешается при условии размещения активной ссылки на оригинальный материал.
© 2008 blizzard. Все права защищены и охраняются законом.



 
----