Содержание

• Иммунная система кишечника и ее взаимодействие с микрофлорой
• Особенности иммунитета новорожденных
• Становление микробиоценоза кишечника
• Нормальный биоценоз ЖКТ
• Взаимодействие микрофлоры и организма хозяина
• Методы коррекции кишечного биоценоза. Пробиотики
• Методы коррекции кишечного биоценоза. Пребиотики

На протяжении ЖКТ разные его отделы существенно отличаются по условиям рН, скорости прохождения химуса, доступности нутриентов, окислительно-восстановительному потенциалу и т.д. Благодаря этим различиям, состав микрофлоры варьирует на протяжении всего пищеварительного тракта.

В ротовой полости обитают многие представители. В течение первых месяцев заселены только поверхность языка и слизистых оболочек, после прорезывания зубов заселяются также их поверхности и десневые карманы. Ротовая полость может быть заселена 500 различными видами микроорганизмов, наиболее частыми являются стрептококки, вейлонеллы, нейсерии, актиномициты. В слюне содержится до 10⁸ КОЕ/мл, а не поверхности эмали зубов - до 10¹¹ КОЕ/г.

Пищевод не имеет своей собственной резидентной флоры. Микробы попадают сюда из ротовой полости, верхних дыхательных путей или с пищей.

Желудок отличается низкими значениями рН - у взрослых от 1,6 до 2,5, но у детей первых месяцев жизни рН может приближаться к нейтральной. Низкие значения рН защищают желудок от колонизации, в желудочном соке микробное число обычно не превышает 10⁴ КОЕ/мл. Как и в пищеводе, большинство микробов желудка имеют орофарингеальное происхождение. Обычно это кислотоустойчивые виды: лактобациллы, стрептококки и Саndida albicans. Особым обитателем является Н.pylori, он обычно заселяет антральный отдел желудка и является патогеном.

Двенадцатиперстная кишка имеет скудную микрофлору - 10^4-5 КОЕ/мл из-за попадания сюда кислого содержимого желудка, желчи и панкреатического сока. Быстрый сброс содержимого также препятствует колонизации этого отдела. Состав микрофлоры сходен с таковым в желудке.

В тощей кишке колонизация составляет 10^5-7 КОЕ/мл, флора состоит из стрептококков, лактобацилл, Наеmophilus, Veilonella, Bacteroides, Corinebacterium, Actinomyces. Благодаря замедлению пассажа в подвздошной кишке, колонизация ее более значительна - 10^7-8 КОЕ/мл, состав микрофлоры сходен с таковым в толстой кишке и содержит факультативные (Enterobacteriaceae) и облигатные анаэробы, а также лактобактерии, энтерококки, Veilonella, Bacteroides, Clostridium.

Толстая кишка содержит огромное количество микробов, около 10^11-12 КОЕ/г содержимого. Бактериологическим методом идентифицировано 40 родов, 113 видов, математически рассчитано, что обитателей значительно больше - около 400-500 видов. Не все организмы могут быть культивированы. Анаэробы значительно превалируют над аэробами - в полости кишки примерно в 100-1000 раз. Но на поверхности слизистой оболочки они превышают лишь в 10 раз из-за проникновения кислорода из тканей. Главные рода микробов в толстой кишке - Bacteroides, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Bacillus, Peptostreptococcus, Fusobacterium, Ruminococcus.

Для детальной оценки состава кишечной микрофлоры в настоящее время стали использовать молекулярные технологии. Классический метод оценки путем посева на различные питательные среды не может считаться точным. Во-первых, количество микробов зависит от способности роста на данной среде (культурабельности штамма). Не все штаммы могут культивироваться, что приводит к недооценке видового многообразия микрофлоры. Во-вторых, среды, используемые для культивирования, не строго специфичны, поэтому одни штаммы растут на них более активно, чем другие. Это может приводить к количественной переоценке одних штаммов и недооценке других. В конечном итоге это дает неточный результат, искажающий состав кишечной микрофлоры.

Успехи в области молекулярной генетики сделали возможным изучение бактериальной популяции небактериологическим способом. Методология основывается на изучении 16S рибосомальной РНК (16-РНК).

Сравнение последовательностей различных бактериальных 16-РНК (длиной примерно 1500 нуклеотидов) показало, что молекулы ее содержат сегменты с различной степенью вариабельности. Это позволяет конструировать филогенетические древа, которые раскрывают эволюционные взаимоотношения между видами.

В настоящее время открыто уже 20 000 последовательностей 16-РНК, что позволяет составить праймеры ДНК (обычно содержащие 18-27 нуклеотидов), соответствующие участкам 16-РНК. Праймеры позволяют определить род, вид и штамм представителей микробиоценоза.

Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) с помеченными флюоресцентной сывороткой нуклеотидами позволяет с высокой точностью детерминировать количественный и качественный состав кишечной микрофлоры. Подсчет микробов может быть визуальным или автоматизированным.

В таблице 4 представлены сравнительные данные состава кишечной микрофлоры при оценке бактериологическим методом и методом FISH.

Другим информативным методом является оценка денатурационного градиента при электрофорезе в геле (ДГЭГ). Он базируется на сепарации в геле специфической последовательности ампликонов 16-РНК (или ДНК). Эти ампликоны разделяются в соответствии со своими качествами в полиакриламидном геле, содержащем градиент ДНК-денатурирующего агента (формалин или мочевина) или температурный градиент. После электрофореза гель окрашивается и получается как бы "отпечаток" биоценоза.

Индивидуальный паттерн может сравниваться с эталоном, полученным после культивирования штаммов. Эта техника была успешно применена для изучения изменчивости биоценоза кишечника в динамике (по данным фекальной флоры). Исследование показало, что индивидуальный состав фекальной микрофлоры в течение 6 мес. оставался достаточно стабильным, что указывает на относительное постоянство микробиоценоза кишечника у здоровых людей.

С помощью ДГЭГ был изучен также внутривидовой состав бифидо- и лактобактерий с помощью группоспецифичных 16S-r-ДНК-праймеров, который оказался также достаточно стабильным. Однако количество представителей той или другой группы микробов с помощью данного метода определить невозможно, а этот показатель может существенно меняться.

Преимуществом метода ДГЭГ является то, что с его помощью можно видеть огромное многообразие штаммов, в том числе тех, которых до настоящего времени не представляется возможным культивировать. Применение этого метода может позволить лучше понять влияние про- и пребиотиков на состав кишечной микрофлоры.

Литература: [показать]