kub
Островок  здоровья

----
  
записная книжка врача акушера-гинеколога Маркун Татьяны Андреевны
----
 
 
 
Генотипирование клеток крови
(исследование генов системы HLA)

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ

Долгое время самым распространенным подходом к идентификации полиморфизма антигенов HLA оставался микролимфоцитотоксический метод, обладающий целым рядом преимуществ перед другими методами в рутинной практике. Внедрение серологических методов HLA-типирования с использованием панелей антисывороток позволило добиться стандартизации при определении аллельспецифичных антигенов (так называемых "специфичностей"). Однако отсутствие качественных серологических реагентов к ряду HLA-антигенов ограничивает возможности этого метода. Кроме того, из-за низкой экспрессии HLA-антигенов доля ошибочных результатов при серологическом определении может достигать 20-25%.

Таким образом, недостаточно высокая надежность стандартных иммунологических методов при типировании HLA-антигенов требует развития новых подходов для решения данной проблемы.

Значительный прогресс в этом направлении достигнут благодаря успехам молекулярной генетики, в частности, клонированию к ДНК HLA-генов и созданию на их основе специфических для каждого гена "зондов", позволяющих анализировать изменения в структуре ДНК. В 1986 году было показано, что при разрезании геномной ДНК рестриктазой Таq I и фракционировании обработанного препарата ДНК путем электрофореза в геле с последующей Саузерн-блот гибридизацией у различных индивидов наблюдается "полиморфизм длин рестрикционных фрагментов" (ПДРФ). Образующийся при этом спектр полученных рестрикционных фрагментов соответствует определенной специфичности исследуемого антигена. Эти результаты явились началом нового этапа в типировании антигенов HLA II класса, позволяющих выявлять существующие различия в антигенной структуре на уровне ДНК. Анализ ПДРФ стал первым из методов идентификации полиморфизма генов НLА, основанных на принципе ДНК-типирования. Он позволил охарактеризовать полиморфизм гена DQА1, многообразие аллельных вариантов генов DRВ1 и DQB1 (табл. 18.21).

Таблица 18.21. Число распознанных аллелей в локусах главного комплекса гистосовместимости HLA
I класс
HLA-A
61(18)
HLA-B
130(35)
HLA-C
36(8)
II класс
HLA-DRBl
137(14)
HLA-DQBI
25(6)
HLA-DP
66(?)
Примечание: в скобках показано число аллелей, идентифицируемых серологически

Однако, широкое использование ПДРФ в клинических целях было затруднено технической сложностью и длительностью проведения анализа. Кроме того, HLA-типирование на основе ПДРФ позволяло судить о структуре кодирующих участков только косвенно.

Новый этап в разработке методов ДНК-типирования антигенов HLA ознаменовало открытие полимеразиой цепной реакции (ПЦР). HLA-генотипирование на основе ПЦР явилось одним из наиболее интенсивно развивающихся направлений данной технологии. Сочетание высокой чувствительности и специфичности реакции с простотой ее постановки и быстротой проведения анализа сделало методы, основанные на ПЦР, наиболее информативными и удобными в рутинной практике HLA-типирования. Метод ПЦР быстро внедряется в практическую работу лабораторий, так как не требует долговременной работы по созданию обширных коллекций редких антисывороток (табл. 18.22).

Таблица 18.22. Применение молекулярно-генетических методов в трансфузиологии
1.Типирование по лейкоцитарным антигенам HLA II класса (DR, DQ, DР) для подбора гистосовместимых пар донор - реципиент
2.Типирование по антигенам тромбоцитов (НРА) - определение причин посттрансфузионных негемолитическнх реакций и рефрактерности к трансфузиям аллогенных тромбоцитов
3.Типирование по антигенам гранулоцитов (NА) - определение причин посттрансфузионных негемолитическнх реакций и этиологии гранулоцитопений
4.Определение эритроцитарных антигенов - определение причин посттрансфузионных гемолитических реакций, профилактика гемолитических реакции новорожденных
5.Микробиологическое тестирование донорской крови - профилактика гемотрансмиссивных инфекций, в том числе - обследование пулов и минипулов донорской крови, контроль инактивации вирусов при производстве препаратов крови
6.Генотерапия - стабильная интеграции генов в гемопоэтические стволовые клетки
7.Производство факторов свертывания крови трансгенными животными и клеточными линиями - альтернативный источник биологически чистых белков крови для заместительной терапии
8.Ингибиция экспрессии специфических генов антисмысловыми олпгонуклеотидами - удаление злокачественно трансформированных клеток из аутотрансплантата костного мозга и аутологичных гемотрансфузионных средств у гематологических больных

Министерством здравоохранения России зарегистрирована первая отечественная тест-систем для HLA-генотипирования (DQА1) (ООО МЦ "Авиценна", Москва).

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ

В последние годы в трансфузионную практику широко вошли реагенты для типирования клеток крови на основе моноклональных антител, которые стали доступными в необходимых количествах. Однако набор специфичных моноклонов к антигенам групп крови все еще не является достаточно полным. Генотипирование эритроцитарных антигенов на основе ПЦР пока используется только в референс-лабораториях, где оно обеспечило новый импульс развития в этой области.

Генотипирование эритроцитов наиболее целесообразно использовать в тех случаях, когда получение клеток крови затруднено или даже связано с определенными опасностями, например, при необходимости антенатального генотипирования плода при высоком риске гемолитической болезни новорожденного. Стоит заметить, однако, что все еще не решен ряд важных проблем при молекулярном типировании, связанных с генетическим разнообразием различных популяций. До тех пор, пока не будет понят молекулярный механизм образования этих D-негативных генотипов, сохранятся проблемы практического применения в клинике D-генотипирования представителей этих популяционных групп. Поэтому в странах с разнообразной этнической структурой населения при обследовании плода должна быть учтена этническая принадлежность родителей.

Сходная ситуация существует и при генотипировании по системе АВО. Существует много генетических вариантов нулевого (0) фенотипа эритроцитов, которые варьируют в различных этнических группах. Генотипирование с помощью ПЦР уже используется в некоторых референслабораториях для подтверждения присутствия редких антигенов или для определения вариантов групповых антигенов, которые создают проблемы при трансфузиях или при беременности.

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ТРОМБОЦИТОВ

Как и при генотипировании эритроцитов, началось стремительное внедрение молекулярно-генетических методов определения тромбоцитарных антигенов в случаях высокой вероятности тромбоцитопении новорожденных, когда получение тромбоцитов сопряжено с трудностями. Разрушение тромбоцитов аллоантителами до уровня тромбоцитопении (менее 100 х 109/л), приводит к тому, что только очень небольшое количество тромбоцитов бывает доступно для серологического исследования. Для методов, основанных на ПЦР, независимо от количества тромбоцитов, достаточным для определения генотипа являются примерно сто микролитров крови или миллилитр амниотической жидкости. Всего имеется пять типов диаллельных тромбоцитарных антигенов, сенсибилизация к одному из которых (анти-НРА-1а) является наиболее частой причиной аллоиммунной тромбоцитопении новорожденного. Уже разработаны тест-системы на основе ПЦР для всех антигенов, имеющих клиническое значение.

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ГРАНУЛОЦИТОВ

Несколько тяжелых патологических состояний, в том числе иммунная нейтропения новорожденных и нейтропения, вызванная лекарственными препаратами, обусловлены антителами к гранулоцитам. При нейтропениях индивидуальное фенотипирование с помощью серологических методов сопряжено с техническими трудностями, так как нейтрофилы - короткоживущие клетки, легко активирующиеся, а антисыворотки к ним относительно малодоступны. В связи с этим для замены серологических исследований гранулоцитов может использоваться ПЦР-анализ, так как для его проведения так же требуется малое количество ДНК, которая, к тому же, может быть получена из различных тканевых источников. В настоящее время разработаны реактивы для генотипирования гранулоцитов по антигенам NА1 и NА2 (экспрессирующимся на Fcg- рецепторах, FcgIIIb нейтрофилов).

Страница 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001




 
 

Куда пойти учиться



 

Виртуальные консультации

На нашем форуме вы можете задать вопросы о проблемах своего здоровья, получить поддержку и бесплатную профессиональную рекомендацию специалиста, найти новых знакомых и поговорить на волнующие вас темы. Это позволит вам сделать собственный выбор на основании полученных фактов.

Медицинский форум КОМПАС ЗДОРОВЬЯ

Обратите внимание! Диагностика и лечение виртуально не проводятся! Обсуждаются только возможные пути сохранения вашего здоровья.

Подробнее см. Правила форума  

Последние сообщения



Реальные консультации


Реальный консультативный прием ограничен.

Ранее обращавшиеся пациенты могут найти меня по известным им реквизитам.

Заметки на полях


навязывание услуг компании Билайн, воровство компании Билайн

Нажми на картинку -
узнай подробности!

Новости сайта

Ссылки на внешние страницы

20.05.12

Уважаемые пользователи!

Просьба сообщать о неработающих ссылках на внешние страницы, включая ссылки, не выводящие прямо на нужный материал, запрашивающие оплату, требующие личные данные и т.д. Для оперативности вы можете сделать это через форму отзыва, размещенную на каждой странице.
Ссылки будут заменены на рабочие или удалены.

Тема от 05.09.08 актуальна!

Остался неоцифрованным 3-й том МКБ. Желающие оказать помощь могут заявить об этом на нашем форуме

05.09.08
В настоящее время на сайте готовится полная HTML-версия МКБ-10 - Международной классификации болезней, 10-я редакция.

Желающие принять участие могут заявить об этом на нашем форуме

25.04.08
Уведомления об изменениях на сайте можно получить через раздел форума "Компас здоровья" - Библиотека сайта "Островок здоровья"

Островок здоровья

 
----
Чтобы сообщить об ошибке на данной странице, выделите текст мышью и нажмите Ctrl+Enter.
Выделенный текст будет отправлен редактору сайта.
----
 
Информация, представленная на данном сайте, предназначена исключительно для образовательных и научных целей,
не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения, и не может служить заменой очной консультации врача.
Администрация сайта не несёт ответственности за результаты, полученные в ходе самолечения с использованием справочного материала сайта
Перепечатка материалов сайта разрешается при условии размещения активной ссылки на оригинальный материал.
© 2008 blizzard. Все права защищены и охраняются законом.



 
----