ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

На наличие аллоантител к антигенам эритроцитов исследуется кровь доноров с гемотрансфузиями и/или беременностями в анамнезе.

При обнаружении аллоантител кровь или плазма донора не должны использоваться для переливания (допускается применение отмытых или размороженных эритроцитов). Сыворотку крови аллосенсибилизированных доноров целесообразно использовать для изготовления типирующих реагентов сывороток.

Исследование аллоантиэритроцитарных антител у пациентов с гемотрансфузиями и/или беременностями в анамнезе проводится перед каждым переливанием эритроцитосодержащих сред. У беременных женщин исследование сыворотки на содержание антител к антигенам эритроцитов проводят в первые 16-20 недель беременности, в случае отсутствия антител в сыворотке повторно - в 30-32 недели. При обнаружении антител или наличии в анамнезе гемотрансфузий, выкидышей, мертворождений, либо гемолитической болезни новорожденных исследование антител проводят в динамике ежемесячно, а также после родов.

При несовпадении с группой крови мужа у женщины с группой крови 0(1), А(II) или В(III) исследуют в сыворотке крови содержание иммунных анти-А- и анти-В-антител.

При первичном скрининге сывороток на антитела к антигенам эритроцитов удобнее пользоваться образцами эритроцитов следующей специфичности:

• эритроциты групп крови А(II) и В(III) - для выявления иммунных анти-А-, анти-В антител;
• эритроциты группы крови 0(1), содержащие максимальный набор антигенов системы Резус и Келл (DСсЕеКк) - для первичного поиска антител;
• эритроциты группы крови 0(1) фенотипа МN, ММ, NN, Р₁ - для выявления антител к антигенам систем МNS и Р.

В случае отсутствия типированных консервированных эритроцитов для первичного поиска антител возможно использование смеси 5-7 образцов группы крови 0(1) D⁺ и 5-7 образцов 0(1)D^–.

Для установления специфичности антител, выявленных при первичном скрининге, необходимо использовать панель эритроцитов, включающую образцы: DСсЕеКк, ССеекк, ссЕЕкк, ссееКК, ссеекк, Dссеекк.

При установлении специфичности, как правило, необходимо типирование эритроцитов лица, в сыворотке которого обнаружены антитела.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ ЭРИТРОЦИТОВ

Первичное исследование антител в сыворотках осуществляют реакцией конглютинации с 10% раствором желатина с образцами эритроцитов фенотипа DСсЕеКк или смесью эритроцитов 5-7 доноров группы 0(1)D⁺ и 5-7 доноров 0(1)D^–, с оценкой результата при микроскопировании. В том случае, когда антитела не выявились, а в анамнезе были множественные гемотрансфузий или осложнения беременности, исследование антител повторяют в антиглобулиновом тесте.

Если антитела к антигенам эритроцитов выявлены, специфичность их подтверждается в лаборатории, имеющей панель типированных эритроцитов, в антиглобулиновом тесте. Для получения более точных результатов целесообразнее посылать на типирование не только сыворотку, но и эритроциты лица, у которого обнаружены антитела.

При обнаружении антител к антигенам эритроцитов выписывают ответ, который переносится в донорский журнал или историю болезни. В ответе обязательно указывается, что в случае необходимости гемотрансфузионной терапии, индивидуальный подбор крови осуществляют с применением антиглобулинового теста. Бланк ответа остается у донора или больного, хранится в течение всей жизни и предъявляется при госпитализации.

Данные об эффективности использования различных методов определения антиэритроцитарных антител приведены в табл. 18.5.

Метод выявления антител с применением 33% раствора полиглюкина мало пригоден для поиска антиэритроцитарных антител: во-первых, метод не позволяет выявлять антитела любой специфичности, присутствующие в сыворотке в низком титре, во-вторых, не обеспечивает выявления антител специфичности Даффи и Кидд, а также некоторых других систем.

Метод с применением желатина с учетом результата при микроскопировании позволяет выявить большинство специфичностей антител, в том числе и присутствующих в сыворотках в низком титре. Однако, нужно помнить, что встречаются антитела (кроме антител системы АВО, MNS, Р), взаимодействующие с эритроцитами только в антиглобулиновом тесте.

Определение антител с применением 33% раствора полиглюкина и желатина аналогично приведенному в разделе "Проведение пробы на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента". В качестве тест-эритроцитов используют панель стандартных типированных эритроцитов или смесь эритроцитов от 4-5 доноров с резус-положительной и от 4-5 доноров с резус-отрицательной принадлежностью крови группы 0(1). Тест-эритроциты не должны содержать аутоантител (прямой антиглобулиновый тест - отрицательный).

Длительность и трудоемкость выполнения антиглобулинового теста в обычной постановке затрудняет возможность его широкого использования при поиске антител. Для сокращения времени проведения исследования и повышения его чувствительности целесообразно использовать модификации антиглобулинового теста:

• с использованием раствора низкой ионной силы (РНИС; LISS)

  Непрямой антиглобулиновый тест с использованием раствора низкой ионной силы (РНИС)

  Приготовление РНИС

  1. 9 г глицина растворяют в 250 мл дистиллированной воды, к нему по каплям добавляют 0,1 М раствор NаОН до рН 6,7;
  2. готовят 0,15 М раствор NаН₂РО₄ (1,8 г соли растворить в небольшом количестве дистиллированной воды и довести объем до 100 мл);
  3. готовят 0,15 М раствор Nа₂НРО₄ (2,13 г соли растворить в небольшом количестве дистиллированной воды и довести объем до 100 мл);
  4. смешивают растворы (2) и (3) до рН 6,7. Берут 10 мл смеси;
  5. 0,89 г хлорида натрия растворяют в 50 мл дистиллированной воды;
  6. смешивают 250 мл раствора (1), 10 мл раствора (4) и 50 мл раствора (5);
  7. доводят объем до 500 мл дистиллированной водой.

  Приготовленный таким образом раствор разливают по 50 мл во флаконы, закрывают резиновыми пробками, завальцовывают и стерилизуют 30 мин при 1,2 атм. Стерильный раствор может храниться при +4°С в течение 2 лет. Контроль качества реактива проводится визуально: бесцветный прозрачный раствор пригоден для использования; при появлении хлопьев раствор использовать нельзя.

  Проведение непрямого антиглобулинового теста с РНИС

  Ход определения:

  • эритроциты отмывают 1 раз 0,9% раствором хлорида натрия и 1 раз РНИС, объем добавляемых растворов должен быть в 20 раз больше объема эритроцитов;
  • готовят рабочую (10-20%) взвесь эритроцитов в РНИС;
  • в пробирке смешивают: 1 объем взвеси стандартных эритроцитов и 2 объема исследуемой сыворотки;
  • в качестве отрицательного контроля используют сыворотку, заведомо не содержащую антиэритроцитарные антитела;
  • в качестве положительного контроля используют сыворотку, заведомо содержащую антитела к антигенам тест-эритроцитов;
  • опыт и контроли инкубируют 7 мин в водяной бане при температуре 46-48°С;
  • после инкубации эритроциты отмывают 3-4 раза 100-кратным избытком 0,9% раствора хлорида натрия. О правильности отмывания эритроцитов свидетельствует отрицательная проба на белок в надосадочной жидкости с 20% раствором сульфосалициловой кислоты;
  • готовят 10% взвесь отмытых сенсибилизированных эрироцитов в 0,9% растворе хлорида натрия;
  • смешивают на плоскости 1 каплю 10% взвеси эритроцитов и 2 капли антиглобулиновой сыворотки. Результат оценивают в течение 10 мин при покачивании планшета.

  Наличие агглютинации в опытной пробе свидетельствует о содержании в исследуемой сыворотке антител к антигенам эритроцитов. Установить специфичность этих антител можно только при использовании панели типированных эритроцитов. Отсутствие агглютинации (гомогенное окрашивание капли) - исследуемая сыворотка не содержит антител к антигенам эритроцитов.

• "спин"-метод

  "Спин"-метод для оценки результатов прямого и непрямого антиглобулиповых тестов

  В качестве контроля в "спин"-методе используют: для непрямого антиглобулинового теста смесь 1 объема отмытых 4-5 раз исследуемых эритроцитов и 2 объемов антиглобулиновой сыворотки, а для прямого антиглобулинового теста - смесь 1 объема отмытых 4-5 раз исследуемых эритроцитов и 2 объемов 0,9% раствора хлорида натрия. Обе контрольные пробы центрифугируют в течение 1 мин при 1000 об./мин. Контроли должны быть всегда отрицательными и свидетельствовать о соблюдении режима центрифугирования.

  Ход определения:

  • смешивают в пробирке 1 объем 5% взвеси отмытых сенсибилизированных эритроцитов и 2 объема антиглобулиновой сыворотки;
  • центрифугируют пробирку со смесью 1 мин при 1000 об./мин;
  • пробирку встряхивают и визуально оценивают результаты исследования, а при получении отрицательного результата - каплю исследуемой взвеси переносят на стекло и микроскопируют при малом увеличении.

  Наличие агглютинации при визуальном или микроскопическом наблюдении свидетельствует о положительном результате: исследуемые эритроциты сенсибилизированы антителами.

  Отсутствие агглютинации свидетельствует об отрицательном результате: эритроциты антителами не сенсибилизированы.

Страница 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001