ПРОБЫ НА ИНДИВИДУАЛЬНУЮ СОВМЕСТИМОСТЬ КРОВИ ДОНОРА И РЕЦИПИЕНТА

Целью пробы на индивидуальную совместимость является предотвращение трансфузий несовместимых эритроцитов. Тестирование сыворотки реципиента с эритроцитами предполагаемого донора - наиболее надежный способ выявления антител, способных вызвать повреждение перелитых эритроцитов, посттрансфузионные реакции, в том числе и гемолитические. Проведение такой пробы позволяет:

1. подтвердить АВО совместимость донора и реципиента;
2. выявить все антитела в сыворотке реципиента, направленные против антигенов эритроцитов донора.

Проба на индивидуальную совместимость крови по антигенам системы АВО

Ход определения:

• на чистую сухую поверхность планшета или пластинки при комнатной температуре наносят и смешивают в соотношении 10:1 сыворотку реципиента и кровь донора;
• периодически покачивая планшет, наблюдают за ходом реакции;
• при отсутствии агглютинации в течение 5 мин кровь совместима. Наличие агглютинации указывает на несовместимость крови реципиента и донора. Такую кровь переливать нельзя. В сомнительных случаях результат пробы контролируют под микроскопом: при наличии "монетных столбиков", исчезающих после добавления теплого (+37°С) 0,9% раствора хлорида натрия, кровь совместима; если в капле смеси видны агглютинаты, не расходящиеся при добавлении теплого 0,9% раствора хлорида натрия,- кровь несовместима.

Проба на совместимость крови по антигенам системы резус с применением 33% раствора полиглюкина

Поскольку чувствительность этой пробы низкая, применять ее в стационарных лечебных учреждениях не рекомендуется. Допускается выполнение пробы на совместимость с применением 33% раствора полиглюкина при необходимости проведения переливания крови в экстремальных условиях.

Проба на совместимость по антигенам системы резус не заменяет, а дополняет пробу на совместимость по антигенам системы АВО.

Ход определения:

• на дно маркированной пробирки вносят 2 капли сыворотки больного, одну каплю донорской крови и одну каплю 33% раствора полиглюкина;
• перемешивают содержимое пробирки встряхиванием;
• медленно поворачивают пробирку так, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки. При этом увеличивается выраженность реакции агглютинации;
• через 5 мин добавляют 2-3 мл физиологического раствора;
• перемешивают содержимое, 2-3 раза аккуратно перевертывая пробирку, не взбалтывая;
• наличие агглютинации в пробирке указывает, что кровь донора несовместима с кровью пациента и поэтому не может быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, и не наблюдается признаков агглютинации эритроцитов - кровь совместима.

Проба на индивидуальную совместимость крови с применением центрифугирования

Ход определения:

• помещают 2 капли сыворотки реципиента на дно маркированной пробирки;
• добавляют 1 каплю 5% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора в растворе низкой ионной силы - РНИС (при отсутствии РНИС можно использовать физиологический раствор, в этом случае ухудшается фиксация антител). Методика приготовления 5% взвеси трижды отмытых эритроцитов приведена в описании постановки непрямой пробы Кумбса;
• сразу после смешивания эритроцитов донора и сыворотки реципиента центрифугируют образец в течение 15-20 с при 2000 об./мин;
• визуально определяют наличие гемолиза в надосадочной жидкости;
• аккуратно покачивая пробирку, ресуспендируют клеточный осадок и визуально определяют наличие агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов может означать:
  • а) несовместимость по системе АВО;
  • б) присутствие в сыворотке реципиента полных холодовых антител иной специфичности (анти-М, анти-N, анти-S и др).

Проба на индивидуальную совместимость крови с использованием раствора желатина

Необходимо использовать чистый, без хлопьев, прозрачный желатин, застывающий при температуре +4°С. Желатин нельзя замораживать. Для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов раствором желатина целесообразно проверять каждую серию желатина в контроле с несенсибилизированными эритроцитами.

Ход определения:

Проводят пробу на индивидуальную совместимость крови с применением центрифугирования. Если не выявлено гемолиза, и эритроциты образовали гомогенную суспензию после встряхивания пробирки:

• подогревают 10% раствор желатина в водяной бане до разжижения (+46-48°С) в течение 10 мин;
• к смеси эритроцитов донора и сыворотки реципиента (в соотношении 1:2) добавляют 2 капли подогретого 10% раствора желатина и тщательно перемешивают;
• в течение 10 мин инкубируют пробирку при +46-48°С на водяной бане или в течение 30 мин - в термостате;
• добавляют 5-8 мл физиологического раствора и аккуратно перемешивают, 1-2 раза перевертывая пробирку;
• визуально определяют наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов. При отрицательном результате переносят каплю взвеси эритроцитов из пробирки на предметное стекло и микроскопируют при малом увеличении.

При выявлении агглютинации кровь донора и реципиента несовместима по антигенам эритроцитов.

В качестве отрицательного контроля используют следующие пробы:

• а) смесь эритроцитов донора с желатином и 0,9% раствором хлорида натрия (в соотношении 1:2:2);
• б) смесь эритроцитов и сыворотки реципиента с желатином (в соотношении 1:2:2).

Проба на индивидуальную совместимость крови с использованием антиглобулинового реагента

Нельзя производить повторное замораживание-оттаивание антиглобулинового реагента. Для контроля качества антиглобулинового реагента целесообразно провести антиглобулиновый тест с резус-положительными эритроцитами, сенсибилизированными IgG (неполными) анти-D-антителами.

Ход определения:

Проводят пробу на индивидуальную совместимость крови с применением центрифугирования. Если не выявлено гемолиза, и эритроциты образовали гомогенную суспензию после встряхивания пробирки:

• инкубируют пробирку при 37°С в течение: 15 мин при использовании РНИС, либо 45 мин при использовании физиологического раствора;
• центрифугируют пробирку в течение 15- 20 с при 2000-3000 об./мин;
• визуально определяют наличие гемолиза в надосадочной жидкости;
• аккуратно покачивая пробирку, ресуспендируют клеточный осадок и визуально определяют наличие агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов свидетельствует об имеющихся у реципиента полных тепловых антителах к антигенам эритроцитов донора;
• при отсутствии гемолиза и агглютинации тщательно 3-4 раза отмывают эритроциты, каждый раз используя 5-10 мл физиологического раствора;
• удаляют физиологический раствор;
• добавляют 1-2 каплю антиглобулинового реагента к осадку эритроцитов и тщательно перемешивают;
• центрифугируют 15-20 с при 2000- 3000 об./мин;
• аккуратно ресуспендируют осадок эритроцитов и визуально определяют наличие или отсутствие агглютинации;
• визуально определяют наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов.

При отрицательном результате переносят каплю взвеси эритроцитов из пробирки на предметное стекло и микроскопируют при малом увеличении.

При выявлении агглютинации кровь донора и реципиента несовместима по антигенам эритроцитов.

В качестве отрицательных контрольных проб используют:

• смесь 5% взвеси тест-эритроцитов с 0,9% раствором хлорида натрия (в соотношении 1:2) - контроль на спонтанную агглютинацию;
• смесь 5% взвеси тест-эритроцитов с анти-глобулиновым реагентом (в соотношении 1:2) - контроль аутосенсибилизации.

Контроль активности антиглобулинового реагента (всегда положительная реакция) - смесь 5% взвеси донорских эритроцитов группы 0(I) D⁺, сенсибилизированных антирезусной сывороткой (содержащей анти-D-антитела класса IgG) и антиглобулинового реагента (в соотношении 1:2).

Контроль специфичности антиглобулинового реагента (всегда отрицательная реакция) - смесь 5% взвеси донорских эритроцитов группы 0(I) D^- (после инкубации с антирезусной сывороткой в течение 45 мин) и антиглобулинового реагента (в соотношении 1:2).

Антиглобулиновый реагент хранят замороженным при -20°С (сухой реагент можно хранить при комнатной температуре). Недопустимо повторное замораживание-оттаивание реагента.

Причины ложноположительных результатов:

1. присутствие аутоантител на поверхности тест-эритроцитов;
2. тест-эритроциты содержат микробные примеси;
3. нарушение режима центрифугирования (механическое повреждение мембраны эритроцитов при чрезмерной нагрузке).

Причины ложноотрицательных результатов:

1. тест-эритроциты плохо отмыты, или остатки белков сыворотки присутствуют на стенках пробирки;
2. нарушение режимов отмывания или инкубации;
3. потеря активности сыворотки или тест-эритроцитов в процессе хранения;
4. низкая активность антиглобулинового реагента;
5. недостаточное время инкубации.

Страница 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

всего страниц: 10

ЛИТЕРАТУРА [показать] .

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001