Интерес к фенольным соединениям вообще и к их биологическому действию в частности вызван широким, практически всеобщим их распространением в растительном и животном мире, наличием у этого класса веществ достаточно высокой и разнообразной химической, биохимической и физиологической активностей.

По мере выделения, очистки и изучения фенольных соединений стало возможным их использование в качестве лечебных средств, а также как биологически активных пищевых добавок, что в свою очередь, стимулировало исследования механизма действия на организм животных и человека. Применение фенольных антиоксидантов в пищевой и парфюмерной промышленности, в производстве лекарственных препаратов, в виде стабилизирующих, консервирующих присадок, сделало актуальной задачу изучения длительного воздействия малых количеств фенольных соединений.

Из медико-биологических эффектов растительных полифенольных комплексов наиболее изучено воздействие их на проницаемость и резистентность стенки кровеносных сосудов (Р-витаминное действие), представляющее важное проявление фармакологической активности фенолов, а также служащее одним из главных показаний к профилактическому и лечебному применению этих соединений.

Своеобразие фармакологического действия растительных фенольных композиций, в сочетании с низкой токсичностью большинства из них, послужило основанием для использования ряда фенольных препаратов в качестве средств профилактики и лечения болезней человека, чему способствовало установление роли фенолов как действующих начал многих средств народной медицины.

Наиболее многочисленный класс природных фенольных соединений составляют флавоноиды - вещества с дифенилпропановым скелетом. Структурными элементами молекул этих соединений являются два ароматических кольца А и В, содержащие различное количество фенольных гидроксилов и других заместителей и соединенные между собой пропановым (СЗ) мостиком, посредством которого в молекулах большинства флавоноидов образуется гетероцикл.

Различают структурные классы флавоноидов, которые включают - катехины, лейкоантоцианидины, антоцианидины, флаваноны, флаванонолы, флаванолы, флавоны, дигидрохалконы, халконы и ауроны.

Обзор структуры и свойств растительных фенольных соединений позволяет утверждать, что главными функциональными группами фенолов, определяющими их поведение, химическую активность, биохимическое и, стало быть, фармакологическое действие, являются фенольные гидроксилы. Из числа реакций, обусловленных активностью гидроксильных групп, наибольший интерес и практическую важность представляют, пожалуй, реакции окисления.

В отличие от чистых восстановителей, для проявления эффекта которых необходимо их присутствие в реагирующей смеси, по крайней мере, в таком же количестве, как и восстанавливаемого вещества, фенольные антиоксиданты способны, даже в виде ничтожно малых добавок, сильно угнетать процесс окисления.

Установлено, что флавоноиды являются активными акцепторами радикальных и ион-радикальных частиц (ОН, 0₂, R, R 0^-₂), т.е. могут регулировать скорость реакций перекисного окисления.

Обратимое образование оксокомплексов между молекулами флавоноидов и кислорода, Фл...0₂, позволяет им изменять локальную концентрацию кислорода в клетке, защищать легко окисляемые участки клетки и реакционные центры или поставлять кислород при его общем дефиците. Обнаружено, что флавоноиды (в частности, - кверцетин и морин) являются высокоактивными комплексообразователями и способны обратимо, в зависимости от pH среды, выводить ионы тяжелых металлов, радионуклидов и металлов переменной валентности, являющихся сенсибилизаторами процессов перекисного окисления в биологических тканях (А. Ревина, 1997).

Обнаружена высокая обратимость радиационнохимических превращений молекул флавоноидов (особенно антоциановой группы) за счет высоких скоростей реакций с переносом заряда и энергии возбуждения промежуточными продуктами пигментов антоциановой группы. Данное свойство флавоноидов способно объяснить защитное действие достаточно низких концентраций флавоноидов, либо препаратов на их основе.

Известно, что фенольные гликозиды, а также лейкоантоцианы - это своеобразная форма сохранения и резервирования, облегчающая мобилизацию запасных веществ при увеличении интенсивности или перестройке обменных процессов, например, при прорастании. Фенольные гликозиды, подвергаясь реакциям гидроксилирования и разрыва кольца, могут использоваться в качестве субстратов окисления как энергетический материал.

Исторически важную роль в развитии представлений об активном участии фенольных соединений в обмене веществ растений сыграли исследования В.И. Палладина. По его представлениям, фенольные соединения, есть ни что иное как дыхательные хромогены, участвующие в процессах клеточного дыхания растений, а окисленные (хинонные) формы фенольных веществ выступают в качестве акцепторов водорода на конечных этапах процесса дыхания и затем вновь окисляются специфическими оксидазами.

Одним из интереснейших направлений практического применения в медицине полифенольных соединений является их лечебное действие у больных, страдающих лимфовенозной недостаточностью. С этой целью используют 5,6-бензо-а-пирон (кумарин), торговое название "ЛОДЕМА" (Австралия), "ЛИМФЕКС" (Швейцария), "ЛИЗЕДЕМ" (Франция); 0-(В-гидроксиэтил)-рутозиды - ВЕНОРУТОН, ТРОКСЕВАЗИН; производные флавоноидов - диосмин и гесперидин в соотношении 9:1 под торговым названием ДЕТРАПЕКС (Франция).

Все выше указанное и явилось предпосылкой для изучения лимфотропного эффекта новых растительных полифенольных соединений, тем более, что необходимость в лекарственных препаратах, способных восстанавливать нарушенные функции лимфатической системы, ощущается достаточно остро.

В нашей работе мы использовали экспериментальные модели лимфодепрессивных состояний сосудистого генеза: артериальная ишемия (окклюзия бедренной артерии); лимфостаз (окклюзия грудного лимфатического протока); венозный стаз (окклюзия каудальной полой вены).

Изучены полифенольные комплексы, выделенные из подземных органов шиповника майского (патент № 2094049 от 27.10.97 "Средство, улучшающее гемо- и лимфоциркуляцию и усиливающее регенераторные процессы в лимфатических узлах при артериальной ишемии"); полифенольный комплекс, полученный из корней кровохлебки лекарственной - фармакологический препарат САНГВИТОН "Для лечения хронической лимфо-венозной недостаточности" (проходит экспертизу в Фармакологическом Комитете М3 РФ).

Эффективность потенциальных лекарственных препаратов для лечения хронической венозной недостаточности зависит не только от способности лекарственного препарата восстанавливать сосудистые нарушения, но и от их способности восстанавливать нарушенные морфо-функциональные показатели лимфоидной паренхимы. Экспериментальная модель венозного застоя создавалась лигированием каудальной полой вены под эфирным наркозом. В качестве препарата сравнения использовали комерческий препарат троксевазин в дозе 10 мг /кг, изучали лимфотропную активность полифенольного комплекса из кровохлебки лекарственной - САНГВИТОН. Морфометрические показатели микроанатомической организации лимфатических узлов из зоны окклюзии изучали с помощью микростереопроектора фирмы "Карл Цейс Йена" при увеличении в 32 раза, клеточный состав паренхимы узла с помощью морфометрической вставки при увеличении в 1080 раз. Объемный кровоток изучали методом полярографии с водородной меткой.

Обнаружено, что венозный застой и лимфостаз вызывает значительное снижение объемного кровотока в зоне окклюзии, что составляет 30-40% от исходных величин. Лечение животных сангвитоном увеличивало гемоперфузию до величин, близких к контрольным показателям (94%) в условиях лимфостаза и до 72% при флебоокклюзии, что существенно превосходит эффект троксевазина, на фоне лечения которым и через 2 месяца после окклюзии объемный кровоток оставался сниженным (рис. 1).

Нарушения объемного кровотока в зоне вено- и лимфоокклюзии сопровождаются существенными изменениями структурной организации лимфатических узлов, а также клеточного состава лимфоидной паренхимы лимфоузлов. Флебоокклюзия приводила к уменьшению площади сечения лимфоузла и его основных структур, отмеченные изменения сохранялись в течение 1 месяца после венозной окклюзии. На фоне лечебного применения полифенолов кровохлебки лекарственной (препарат сангвитон) площадь сечения основных структур лимфатического узла в окклюзиро-ванном регионе не отличалась от показателей контрольных групп (рис. 2 - не приводится в связи с отсутсвтием в первоисточнике).

У животных на модели окклюзии грудного лимфатического протока, также наблюдалось развитие нарушений в структурной организации лимфатического узла, которые сопровождались увеличением площади сечения основных структур узла. Лечение данной группы животных сангвитоном в течение 1 месяца приводило к практически полной нормализации площади сечения лимфоузла, коркового плато и др. его структур (рис. 2).

На фоне флебоокклюзии и лимфостаза изменяется и клеточный состав структур лимфатического узла. При этом численная плотность клеток в расчете на единицу площади изменяется не столь существенно, как общее их содержание. Так, через 30 суток после лигирования полой вены общее число клеток коркового плато лимфатического узла снижалось в 2,6 раза, однако, на фоне общего снижения клеток, резко возрастало количество дегенерирующих клеток, нейтрофилов и макрофагов, что отражает развивающиеся в ткани узла деструктивные и дистрофические процессы. Помимо вышеуказанных изменений в паренхиме лимфоузла в зоне с затрудненным венозным оттоком появляются плазмобласты и плазматические клетки, что свидетельствует о стимуляции иммунологической активности лимфатических узлов. Использование в качестве лечения венозного застоя троксевазина приводит к частичному, а энтеральное введение препарата сангвитон способствует полному восстановлению численного состава клеток лимфоидной паренхимы коркового плато лимфатического узла (рис. 3).

На фоне лечения сангвитоном флебоокклюзионного синдрома практически полностью восстановился клеточный состав малых лимфоцитов; на фоне лечения троксевазином численный состав малых лимфоцитов не имел положительной динамики. Количественный состав лимфоцитов является важным показателем, ибо с малыми лимфоцитами связывают трофические процессы. При завершении жизненного цикла малых лимфоцитов и их распаде происходит реутилизация важных для организма веществ, таких как нуклеиновые кислоты и продукты белкового обмена. Указанные промежуточные продукты стимулируют лимфоцитопоэз, рост и регенерацию тканей, создают условия для передачи морфогенетической иммунной информации.

Как было отмечено выше, на фоне флебоокклюзии, в структурах лимфатического узла нарастает количество дегенерирующих клеток, макрофагов и эозинофилов. Возрастает число тучных клеток, нейтрофилов, что свидетельствует о сохраняющейся воспалительной реакции в лимфатических узлах в зоне окклюзии. Асептический воспалительный процесс в лимфатических узлах является причиной резкого увеличения числа дегенерирующих клеток, при этом митотическая активность клеток оказывается подавленной.

Таким образом флебоокклюзия без фармакологической коррекции приводит не только к нарушению анатомической организации лимфоузла, но и сопровождается грубыми изменениями клеточного состава лимфоидной паренхимы, что, в конечном итоге, ограничивает функциональные возможности лимфатической системы в целом.

Фармакотерапия флебоокклюзии троксевазином существенно уменьшает содержание в клеточной популяции дегенерирующих клеток (при флебоокклюзии их количество возрастает в 10 раз), при лечении животных троксевазином их количество снижается , но все же превышает контрольные параметры в 5 раз (рис. 4); лечение флебоокклюзии полифенольным препаратом (сангвитоном) снижает их содержание до уровня интактных крыс.

На фоне флебоокклюзии без лечения, увеличение числа дегенерирующих клеток сопровождается снижением количества клеток в фазе митоза и составляет всего 44% от уровня интактных. Данное явление можно понять, как преобладание деструктивных процессов над репаративными в клетках лимфоидной паренхимы лимфатических узлов.

У животных, пролеченных троксевазином, наряду со снижением числа дегенерирующих клеток увеличивается количество клеток в фазе митоза, однако, не достигает фона интактных (55%). В группе животных, леченных сангвитоном, снижение количества дегенерирующих клеток в паренхиме узла сопровождается значительным увеличением клеток в фазе митоза, что свидетельствует о способности сангвитона стимулировать репаративные процессы в клетках лимфоидной паренхимы в большей мере, чем при лечении троксевазином.

В условиях экспериментального лимфостаза, через 45 суток после перевязки цистерны грудного лимфатического протока, в паренхиме лимфатического узла, а именно, - в корковом плато-, в 8 раз возрастает количество дегенерирующих клеток и уменьшается число клеток в фазе митоза. У животных, леченных троксевазином, не отмечено снижения количества дегенерирующих клеток; напротив, их количество нарастало. Число клеток в фазе митоза увеличивалось, но не достигало уровня интактных крыс. В группе животных, подвергавшихся лечению сангвитоном, наблюдалось значительное снижение количества дегенерирующих клеток, однако, их число не достигало уровня интактных крыс. Количество клеток в фазе митоза резко увеличивалось и превышало уровень интактных животных в 2 раза, (рис. 5).

Таким образом, получены убедительные доказательства высокой эффективности полифенолов кровохлебки (препарат сангвитон), способных в условиях флебоокклюзии и лимфостаза восстанавливать нарушенную гемодинамику, клеточный состав паренхимы лимфоузлов, а также их микроанатомическую структуру.

Важным критерием эффективности препарата, кроме выше названных, при лечении лимфо-венозной недостаточности является их способность сохранять и восстанавливать не только численный состав клеток лимфоидной паренхимы, но и их ультраструктурную организацию. В условиях экспериментальной лимфовенозной недостаточности (флебоокклюзия, лимфостаз) формируются четкие изменения ультраструктурной организации практически всех клеток лимфоидной паренхимы. Наиболее характерные изменения выражаются в уменьшении объема цитоплазмы клеток, объема и числа митохондрий, снижении числа свободных и прикрепленных рибосом. Уменьшение объема шероховатого эндоплазматического ретикулума (ШЭР) в клетках, а также числа рибосом свидетельствует об ограничении белоксинтетических, репаратив-ных возможностей клетки. Уменьшение количества митохондрий, а также более чем в 2 раза уменьшение площади внутренней мембраны митохондрий, указывают на ограниченные энергосинтезирующие возможности клеток лимфоидной паренхимы (рис. 6).

Таким образом, можно заключить, что в условиях затрудненного венозного оттока и нарушенного лимфатического дренажа тканей развиваются и нарастают выраженные изменения в ультраструктурах практически всех клеток лимфоидной паренхимы. Редуцированный энергетический и пластический потенциал клеток лимфоузла неизбежно приводит к ограничению функций клеток лимфоидной паренхимы, что поддерживает вялотекущие деструктивно-воспалительные процессы в зоне нарушенного лимфо-венозного дренажа. Поэтому эффективность фармакотерапии лимфо-венозной патологии во многом зависит не только от способности лекарственного препарата стимулировать тонус вен, увеличивать объемный кровоток, стимулировать процессы лимфооттока и снижать степень выраженности высокобелковых отеков при лимфедеме, но и содействовать восстановлению поврежденных структур и функций клеток и, в первую очередь, пластических и энергопродуцирующих.

В процессе изучения влияния лекарственных препаратов на процессы восстановления поврежденных ультраструктур клеток, показано, что в группе животных, леченных троксевазином не наблюдается восстановления численного состава свободных и прикрепленных рибосом (рис. 6). На фоне лечения животных сангвитоном количество прикрепленных и свободных рибосом приближалось к показателям интактных животных. Восстановление сангвитоном морфометрических характеристик рибосомальных структур клеток свидетельствует о восстановлении в клетках пластических и репаративных процессов. Функциональное состояние клеток лимфоидной паренхимы лимфатического узла в значительной степени зависит и от состояния энергопродуцирующих клеточных образований. В условиях лимфостаза митохондриальный аппарат клеток претерпевает глубокие изменения (рис. 7). Статистически достоверно уменьшается число митохондрий, уменьшается их площадь, что говорит об ограничении энергетических возможностей митохондриального аппарата. Лечение животных сангвитоном способствует восстановлению митохондриальных структур клеток по основным морфометрическим показателям.

Таким образом, биофлавоноиды кровохлебки лекарственной (препарат сангвитон) обладают выраженным лимфо- и веностимулирующим действием. В условиях экспериментальной патологии сангвитон не только восстанавливает показатели гемодинамики в зоне окклюзии, но и обладает, в отличие от троксевазина, способностью нормализовать нарушенные микроанатомические, клеточные и субклеточные повреждения лимфатического узла и его паренхимы.

Влияние полифенолов, выделенных из подземных органов шиповника майского, на лимфовенозную и иммунную системы организма

Чрезвычайно интересной моделью патологии для изучения лимфотропных свойств новых потенциальных лекарственных препаратов для лечения заболеваний лимфо-венозной системы следует признать артериальную ишемию. После перевязки наружной подвздошной артерии объемный кровоток в большой приводящей мышце бедра составляет 19% от исходной величины кровотока. В течение последующих 7-и суток объемный кровоток достаточно быстро восстанавливается и к 7-м суткам достигает 73% от контрольных показателей. Однако дальнейшего восстановления объемного кровотока не происходит и к концу 2-го месяца эксперимента объемный кровоток не превышает 73% от контроля. Медикаментозная коррекция артериальной ишемии неселективным альфа-адренобло-катором регитином способствовала некоторому ускорению восстановления показателей объемного кровотока в первые 3-ое суток после артериальной окклюзии, в отдаленные сроки (от 7 суток до 2-х месяцев) объемный кровоток на фоне введения регитина существенно не отличается от показателей объемного кровотока у животных без лечения. На фоне лечения артериальной ишемии биофлавоноидами шиповника -до 7-х суток величина объемного кровотока не превышала 50% от уровня интактных животных, однако, уже через 1 месяц после окклюзии наружной подвздошной артерии, при продолжающемся лечении, наблюдается полное и стабильное восстановление кровоснабжения тканей, чего не удалось добиться при лечении ишемии регитином (рис. 8).

Через 1 месяц после окклюзии наружной подвздошной артерии в зоне оккпюзированной артерии отмечается не только редуцированный кровоток, но и отчетливые признаки атрофических процессов в подколенных лимфатических узлах.

В результате нарастающих атрофических процессов в структурах лимфатического узла наблюдаются характерные изменения процессов лимфодинамики. В экспериментах на собаках было установлено, что после лигирования бедренной артнерии показатели притока и оттока лимфы для подколенных лимфоузлов снизились на 33% и 19,7 % соответственно. На стадии 3-х месячной артериальной ишемии показатели транспортной функции лимфатических узлов претерпели существенные изменения. У контрольных животных с ишемией в течение опытного периода произошло резкое ухудшение лимфотока через лимфоузлы. Дефицит оттока, характеризующий уровень гемато-лимфатического обмена внутри лимфоузла, уменьшился по сравнению с таковым в норме более чем в 2 раза, указывая на деструктивный характер изменений в этих органах. Аналогичные нарушения сохраняются и при коррекции артериальной ишемии регитином, тогда как полифенольный препарат шиповника устраняет их полностью, что согласуется с его действием на объемный кровоток (рис. 9 и 10).

Было установлено также, что нарушение лимфотока коррелирует со степенью атрофии лимфатических узлов. Отмечено уменьшение на 38% площади сечения лимфоузлов, на 72% уменьшилась площадь сечения коркового плато. О выраженных склеротических процессах в лимфатических узлах свидетельствует увеличение более чем в 1,5 раза площади сечения капсулы. Указанные дистрофические процессы в лимфоузлах на фоне артериальной ишемии практически не развиваются в случае лечения животных полифенолами шиповника, тогда как в результате применения регитина имела место, хотя и менее интенсивная чем в контроле, но все же прогрессирующая атрофия лимфоузлов, которая становится особенно отчетливой во второй половине опытного срока, когда площадь сечения лимфоузлов уменьшается до статистически различимого с нормой уровня.

Детальный анализ состояния лимфатических узлов крыс в различных вариантах эксперимента позволил сделать вывод о том, что биофлавоноиды из корней шиповника эффективно стимулируют процессы регенерации в ткани узла на уровне мозговых синусов, коркового плато, а также и его клеточного массива.

Оказалось, что показатель площади сечения мозговых синусов подколенных лимфатических узлов (норма 0.572 ± 0,037 мм²) через 1 сутки после лигирования наружной подвздошной артерии возрастал до 0,683 ± 0,044мм², что на 28% ниже нормальных значений. При лечении артериальной ишемии препаратом шиповника данные показатели изменялись в пределах близких к нормальным и составляли 0,680 ± 0,029 - 0.561 ± 0,027 мм²,что согласуется с его нормализующим действием на траспортную функцию лимфатических узлов. Для сравнения можно отметить, что коррекция артериальной ишемии мощным периферическим вазодилататором (α-адреноблокатором) регитином, сопровождается выраженной отечностью мозговых синусов, что приводит к увеличению площади на 31,4%. Последующее снижение этих показателей к концу опыта (через 1,5 месяца) до величин, близких к норме, не сопровождается нормализацией транспортной функции лимфоузлов, что указывает на развившиеся на фоне лечения регитином атрофические изменения. Последнее подтвердилось и результатами изучения действия регитина и полифенолов шиповника на корковое плато лимфатических узлов из зоны ишемии (рис. 11).

Из представленной на диаграмме 11 информации видно, что одним из опасных следствий артериальной ишемии является быстро прогрессирующая атрофия коркового плато. К концу опытного срока площадь коркового плато составила около 40% от контроля, введение регитина увеличило показатель площади плато до 58%, а биофлавоноиды шиповника удерживали данный показатель на уровне 87%. При артериальной ишемии наряду с атрофическими процессами в структурах лимфатического узла, наблюдается депрессия клеточного пула коркового плато, играющего, как известно, важную роль в иммунологической реактивности. Причем, в опытах удалось показать, что общее количество клеток в расчете на площадь среза коркового плато подколенных лимфатических узлов крыс, составляющее в норме 16929±1253 клеток за период 60- суточной ишемии снизилось в контроле до 6098±572 клеток, в группе с применением регитина - до 6864±573 клеток, тогда как в группе с использованием полифенольного препарата шиповника данный показатель находился на уровне 16156±1472 клеток, или в пределах нормы.

Сказанное выше подтверждается и показателями численной плотности клеток в расчете на 1000 мкм² площади среза коркового плато (рис. 12).

Таким образом, мономерные полифенолы шиповника эффективно восстанавливают клеточный состав лимфоидной паренхимы лимфоузла при артериальной ишемии. Через 30 суток после окклюзии наружной подвздошной артерии, кроме нарушения численного состава клеток лимфоидной паренхимы, отмечаются грубые повреждения ультраструктурной организации практически всех клеток лимфоузла, что, несомненно, ограничивает функциональные возможности лимфатической системы. На примере лимфоцитов коркового плато лимфоузла при артериальной ишемии заметно уменьшается объем цитоплазмы, снижается количество и объем митохондрий, более чем в 3 раза уменьшается суммарная площадь внутренней мембраны митохондрий, что говорит об ограничении энергопродуцирующей функции клетки. Резко снижается объем шероховатого эндоплазматического ретикулума (ШЭР) и количество свободных и прикрепленных рибосом.

Как видно из представленных диаграмм (рис. 13, 14 - не приводится в связи с отсутствием в первоисточнике, 15), регитин, обладающий выраженным сосудорасширяющим действием, слабо влияет на восстановление ультраструктурных повреждений, вызванных артериальной ишемией. Биофлавоноиды из шиповника способны полностью восстанавливать площадь сечения цитоплазмы лимфоцита, площадь ШЭР, восстанавливается количественный показатель свободных и прикрепленных рибосом, что обеспечивает полноценные белоксинтетические, пластические процессы в клетке, необходимые для восстановления ее нормальных функциональных возможностей.

Препарат из шиповника более эффективно восстанавливает ультраструктурную организацию митохондрий, что позволяет клетке осуществлять более полное обеспечение клеточных процессов энергией.

Наряду с отчетливым восстанавливающим действием биофлавоноидов шиповника на энергетические и пластические процессы обращает внимание факт предупреждения депрессии клеток иммунобластического ряда в паренхиме лимфоузла. Данное явление позволило предположить способность биофлавоноидов шиповника воздействовать на иммунологические процессы.

Иммуностимулирующее действие биофлавоноидов из шиповника

Иммуностимулирующий эффект изучали на мышах линии СВА и C57BL по способности влиять на первичный гуморальный иммунный ответ к эритроцитам барана (ЭБ) в селезенке интактных мышей СВА и C57BL; первичный гуморальный иммунный ответ на фоне подавленного иммунитета сублетальным облучением, в качестве препарата сравнения использовали иммуно-активный препарат левамизол. Препарат шиповника вводили внутрижелудочно в течение 10 суток в дозах 5-10-50 мг/кг однократно, ежедневно. Левамизол вводили в дозе 2,5 и 10 мг/кг внутрижелудочно по схеме указанной выше. Контрольным животным в течение 10 дней внутрижелудочно вводили 0,5 мл дистиллированной воды.

Результаты исследований показывают, что биофлавоноиды шиповника обладают выраженным иммуностимулирующим действием в 1,5-2 раза по сравнению с контролем и менее выраженным по сравнению с известным иммуностимулятором левамизолом. Хотя иммуностимулирующий эффект шиповника несколько ниже, чем таковой же эффект левамизола, однако левамизол является препаратом искусственного происхождения, его применение вызывает достаточно серьезные осложнения, которые иногда приводят даже к летальному исходу. Биофлавоноиды шиповника обладают более мягким иммуностимулирующим действием, практически нетоксичны и могут использоваться достаточно длительно, в том числе и с профилактической целью.

Пятилистник кустарниковый (лапчатка кустарниковая) Pentaphylloides fruticosa (L) О. Schwarz семейство розоцветных Rosaceae

Сильно ветвистый кустарник, высотой до 150 см, стебли покрыты красно-коричневой или серой корой, в быту растение имеет название курильский чай. Лапчатка кустарниковая имеет широкий ареал распространения в северном полушарии, обитает в арктической и высокогорных областях Европы, Азии и Северной Америки. Устойчивая к низким температурам, может произрастать в долинах горных рек, на лугах и незагущенных хвойных лесах. Произрастает на альпийских и субальпийских лугах, каменистых склонах. Обладает хорошими адаптивными возможностями, сравнительно легко приспосабливается к различным условиям обитания, встречается на высоте до 3000 м над уровнем моря. Большие естественные запасы данного кустарника встречаются на горном Алтае и в Саянах. Лапчатка кустарниковая хорошо известна в восточной медицине (тибетской, индийской, монгольской, китайской), об этом кустарнике упоминается в трактатах тибетской культуры. В индо-тибетской, а также монгольской медицине отвары и настои лапчатки кустарниковой использовали при желудочно-кишечных заболеваниях. Настои и отвары из корней, листьев и цветов, по данным Иркутского противочумного института, обладают выраженным противомикробным действием. При сравнительном изучении водных и спиртовых вытяжек на 5 штаммах классических холерных вибрионов и 5 штаммах вибрионов Эль-Тор методом серийных разведений было установлено, что бактерицидное действие спиртового экстракта проявляется при концентрации в среде 1,25%, а водного -0,5%. Водно-спиртовые экстракты из корневищ и надземной части пятилистника кустарникового в эксперименте in vitro показали высокую антибактериальную активность в отношении грамотрицательной флоры.

В народной медицине отвары и настой пятилистника кустарникового применяют как кровоостанавливающее, противовоспалительное, успокаивающее средство, при желудочно-кишечных заболеваниях, а также в виде полосканий при ангине и стоматите.

Лечебные свойства пятилистника кустарникового определяются присутствием в нем полифенольных соединений. В его надземной части обнаружены флавоноиды - кверцетин, кверцитрин, кемпферол, 7,3,4-три-О-метилкверцетин, 6-галлат-3-O-β-D-галактопиранозид кверцетина, 3-О-α-L-арабопиранозид кверцетина (гиперозид), тернифлорин, трибулозид; дубильные вещества - (+)-катехин, (-)-эпикатехин, (-)-эпигаллокатехин, (-)-эпигаллокатехингаллат; установлено наличие эллаговой, кофейной, n-кумаровой, синаповой и феруловой кислот (Химия в интересах устойчивого развития 5/1997,123-125).

В настоящее время, в связи с возрастающими потребностями в данном растительном сырье и неуклонным сокращением его природных ресурсов, выполнены работы в ЦСБС СО РАН по интродукции пятилистника кустарникового. В этой связи несомненный интерес представляют данные о фитохимической идентичности состава листьев и цветков дикорастущего пятилистника и интродуцированного. Исследования выполненные в ЦСБС СО РАН Н.М. Шкель с соавт., 1997 показали полную сопоставимость флавоноидных составов изучаемых образцов. В образцах, взятых из дикорастущих объектов и интродуцированных, обнаружены агликоны и их гликозиды - кверцетин кемпферол, кверцитрин, изокверцитрин, и астрагалин. Изокверцитрин и астрагалин из пятилистника кустарникового авторами были выделены впервые.

Широкий спектр биологически активных соединений, присутствующих в пятилистнике кустарниковом, делает данный объект привлекательным как для научных исследований, так и с целью использования в качестве биологически активных добавок в лечебном процессе и с целью профилактики ряда заболеваний.

Влияние пятилистника кустарникового (водно-спиртовый экстракт) на иммуногенез

Биологически активную субстанцию получают экстракцией из надземных частей пятилистника 75% этиловым спиртом, с последующим удалением спирта до объема 20% от массы сырья. Очистку осуществляли обработкой сгущенного экстракта хлороформом , с последующим упариваниеим и высушиванием оставшейся субстанции (патент №4871540, 1989,А61К 35/78).

Субстанцию, полученную вышеуказанным способом, изучали на процессе формирования гуморального иммунного ответа на эритроциты барана (ЭБ). Иммунный ответ оценивали методом определения антителообразующих клеток (АОК) селезенки мышей по Canningham. Исследования проведены на 80 самцах, мышей с генетически детерминированной величиной иммунного ответа к тимус-зависимому антигену. Вы-сокоотвечающие (СВА) и низкоотвечающие (C57BL) животные иммунизировались внутривенно в хвостовую вену ЭБ. Величину иммунного ответа оценивали по числу АОК в селезенке мышей на 5-е сутки после введения антигена. Субстанцию пятилистника вводили в 141 желудок мышей через мягкий пластиковый зонд 6-кратно с интервалом в 2-е суток в дозах 10, 50 и 100 мг/кг за 1 час до иммунизации. Статистическую обработку проводили методом непараметрического сравнения рядов Вилкоксона-Манна-Уитни.

Во всех исследованных дозах препарат обнаруживает достоверное стимулирующее действие на гуморальный ответ к тимусзависимому антигену.

Влияние полифенолов пятилистника кустарникового (Potentilla fruticosa L.) на количество антителообразующих клеток в селезенке мышей (СВА * C57BL) F1 гибридов, иммунизированных эритроцитами барана
№	Доза мг/кг	N	М 1X1000	% к контролю	М 1X1000	% к контролю	М 1X1000	% к контролю	Р
1	Контр	20	51,6	*	23,3	*	106,5	*	*
2	10	21	62,3	+20	41,3	+77	97,8	-9	< 0,01
3	50	21	109,3	+110	63,2	+171	175,8	+65	< 0,01
4	100	18	72,4	+43	33,1	+37	159,4	+49	< 0,01
Примечание: N-число наблюдений; М-среднее число АОК в группе; р-критерий достоверности.

Как видно из материалов таблицы, стимуляция гуморального иммунитета биофлавоноидами пятилистника кустарникового наблюдается в диапазоне доз от 10 до 100 мг/кг массы. Наиболее выраженный и стабильный эффект стимуляции отмечен в дозе 50 мг/кг массы.

Наряду с оценкой гуморального звена иммунитета, оценивали выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) in vivo. Животных предварительно сенсибилизировали 0,5% ЭБ. Через 4-суток вводили разрешающую дозу антигена (50% ЭБ 50 мкл) под апоневроз задней лапки и через 24 часа измеряли величину отека лапы. Величину реакции выражали отношением разницы между развившимся отеком на опытной и контрольной (введение растворителя) лапах к толщине контрольной лапы. Комплекс полифенолов из пятилистника кустарникового в дозе 10 мг/кг массы подавляет ГЗТ в 1,6 раза, в дозе 50 мг/кг - в 3,3 раза. Таким образом на интактных линейных мышах биофлавоноиды пятилистника обнаруживают отчетливый иммуностимулирующий эффект на гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген у высоко- и низко отвечающих животных. Реакцию гиперчувствительности замедленного типа полифенолы пятилистника кустарникового дозозависимо подавляли. Представлляет интерес способность биофлавоноидов пятилистника влиять на гуморальный и клеточные звенья иммунных реакций в условиях их депрессии (иммунодефицита). С этой целью на мышах самках C57BL хСВА (на модели пострадиационного угнетения иммунитета) проведены исследования. Субстанцию биофлавоноидов пятилистника вводили курсом 6 раз с интервалом в 2-е суток. Первое введение -через 1,5-2 часа после облучения. Иммунизировали мышей в последний день курса через 1 час после последнего введения биофлавоноидов. Для сравнения одной группе облученных мышей вводили левамизол [Laevomizolum] в дозе 2,5 мг/кг массы. Контрольную группу животных не облучали. Опыт повторен 2 раза. На фоне снижения числа АОК в 13 раз после лучевой агрессии, левамизол в дозе 2,5 мг/кг увеличил количество АОК на 79%, полифенолы пятилистника в дозе 10 мг/кг увеличили число АОК на 19%, в дозе 50 мг/кг на 118% и в дозе 100 мг/кг 46%. При повторном воспроизведении эксперимента были получены близкие показатели. Лучевая агрессия приводила к снижению числа АОК в 10,5 раз, левамизол в дозе 2,5 мг/кг повышал число АОК на 54%, биофлавоноиды пятилистника кустарникового (курильского чая) увеличивали число АОК у облученных мышей в дозе 10 мг/кг на 46%; 50 мг/кг - на 144% и в дозе 100 мг/кг - на 71%. Таким образом, биофлавоноиды пятилистника кустарникового, в условиях пострадиационного иммунодефицита, способны восстанавливать гуморальную иммунную реактивность.

На фоне лучевой депрессии изучена реакция клеточного иммунного ответа на фоне лечения биофлавоноидами курильского чая и левамизола. Полифенолы пятилистника кустарникового подавляют реакцию ГЗТ у облученных мышей в дозе 10 мг/кг в 1,7 раза, в дозе 50 мг/кг в - 3,5 раза и в дозе 100 мг/кг - в 2,2 раза. В контрольных экспериментах с левамизолом в дозе 2,5 мг/кг реакция ГЗТ была подавлена в 1,4 раза.

Таким образом, биологически активные компоненты пятилистника кустарникового проявляют четкую иммуностимулирующую ответную реакцию, которая сохраняется и в условиях экспериментального лучевого торможения иммуногенеза. Полученные экспериментальные данные позволяют рекомендовать полифенольные компоненты пятилистника кустарникового (курильского чая) в качестве средства, восстанавливающего иммунную резистентность, повышающего устойчивость организма к инфекциям, а также при различных формах иммунодефицитных состояний.

Изучение противовирусной активности биофлавоноидов пятилистника кустарникового

Противовирусную активность определяли по отношению к следующим тест-вирусам:

1. РНК-содержащим КА13 (Flores), КВ-З (Nancy), ЕСН011 (Upsala), ВВС (Indiana).
2. ДНК содержащему ВПГ-1 /Л-2

В результате выполненных исследований определяли величину химиотерапевтического индекса (ХТИ) по формуле:

ХТИ = максимальная переносимая доза (МПД) / минимальная ингибирующая доза (МИД).

Было показано, что полифенолы пятилистника кустарникового активно подавляют вирус ECHO 11. Химиотерапевтический индекс 2. В концентрации в 2 раза меньшей, чем максимально переносимая доза для клеток, препарат подавляет указанный выше тест-вирус. Дальнейшие исследования показали четко выраженный эффект полифенолов пятилистника по отношению к вирусу КВ-3 (ХТИ=4). Полифенольный комплекс пятилистника кустарникового ингибировал репродукцию вируса КВ-3 в концентрации в 4 раза меньшей, чем максимальная переносимая доза. В связи с отсутствием растительных препаратов, эффективных в отношении энтеровирусов (КВ-3, ЕСНО-11), выполнить сравнительные исследования не представлялось возможным.

Таким образом, впервые нами установлена активность полифенольного комплекса пятилистника кустарникового в отношении энтеровирусов ЕСНО-11 и КОКСАКИ ВЗ. Известно, что вирус КОКСАКИ ВЗ характеризуется выраженной органо-тропностью и поражает прежде всего сердечную мышцу и поджелудочную железу человека, вирус ECHO 11 известен как возбудитель заболеваний глаз у детей младшего возраста [патент 93010258/14 (009626) 26.02.93.]

Клинические наблюдения по применению пятилистника кустарникового (курильского чая) в виде водного настоя и отвара

• Хроническимй энтероколит с дисбактериозом кишечной флоры [показать]

  Лечение больных с патологией кишечника начиналось в острый или подострый период заболевания и состояло из комбинированного назначения настоя пятилистника с препаратами противомикробного действия. Как правило, с первых дней лечения удавалось добиться исчезновения болей и вздутия живота, нормализовался стул, улучшался аппетит, увеличивался спектр переносимости продуктов питания. После купирования острых признаков пациентам назначался водный настой пятилистника в концентрации (1-5%) на протяжении 3-х месяцев по 100 мл настоя 2 раза в день. В последующем пациентам рекомендовали прерывистые курсы лечения настоем пятилистника кустарникового в течение 2-х месяцев.

  В результате проведенных лечебных программ самочувствие больных длительное время оставалось стабильным (наблюдали на протяжении 3-х лет). У большинства пациентов с исходно подтвержденным баканализом дисбактериоз либо полностью ликвидировался, либо значительно уменьшался.

• Лечение дисбактериоза кишечника у детей с аллергическими поражениями кожи и органов дыхания [показать]

  Полипрагмазия, дефекты иммунной системы, функциональные и органические поражения желудочно-кишечного тракта, ферментативная недостаточность, развивающиеся на фоне бронхиальной астмы, астматического бронхита, детской экземы часто приводят к формированию дисбактериоза кишечника, усугубляющего течение основного заболевания. Из-за высокой степени сенсибилизации детей с аллергическими заболеваниями к лекарственным препаратам, лечение дисбактериоза кишечника в вышеуказанной группе часто болеющих детей представляется непростой задачей. Учитывая сложный фармакотерапевтический анамнез и исходя из новых данных о свойствах активных полифенольных составляющих пятилистника кустарникового, а также сведений из источников народной медицины об использовании данного растения при лечении поносов, болей в животе; проведено лечение 10% настоем пятилистника кустарникового группы детей с аллергическими поражениями кожи и органов дыхания (работа выполнена на базе 4-й поликлинике, врачом высшей категории Е.В. Панариной). Лечение проводилось с согласия родителей, после тщательного клинического обследования. Среди 65 детей, находившихся под наблюдением - 12 были в возрасте 1-3 года; 22 ребенка 3-6 лет; 16 детей 7-12 лет; 15 детей старше 12 лет.

  У всех детей был диагностирован дисбактериоз кишечника - стафилококковой (17%), протейной (15%); клебсиеллезной (7,7%); эшерихиозной (19%0; кандида (11%) этиологии на фоне снижения количества бифидум и колибактерий. Жалобы на дискомфорт, запоры, неустойчивый стул, боли в животе родители отмечали у 63% детей в течение 3-9 лет. Обследование и лечение этим детям до обращения не проводилось. В результате предварительных обследований было сформировано 3 группы детей: получавшие, наряду с диетотерапией, биопрепараты и сборы трав (учитывая данные аллергообследования) - 24 человека; получавшие только настой пятилистника кустарникового - 21 ребенок; получавшие настой пятилистника кустарникового совместно с адаптогенами и биостимуляторами - 20 детей.

  Длительное наблюдение за пациентами и контрольное обследование подтверждают эффективность использования настоя пятилистника кустарникового. Через 1-2 недели у детей исчезли жалобы, нормализовался стул; контрольные исследования, выполненные через 2 месяца после лечения, подтвердили нормализацию показателей.

  Наряду с лечением дисбактериоза в группе детей с хроническими фарингитами, тонзилитами, аденоидитами под контролем определения микробного спектра носоглотки с целью лечения, а также профилактики обострений использовали ингаляции 10% настоя пятилистника. На курс лечения - 8 ингаляций по 5 мл каждая, повторный курс проводился через 3 месяца.

  Выполненные клинические исследования позволяют сделать заключение, что настой пятилистника кустарникового эффективен при лечении дисбактериоза кишечника у детей с аллергическими поражениями кожи и органов дыхания, а также при хронических заболеваниях верхних дыхательных путей.

• Лечение хронических непрерывно рецидивирующих бронхитов [показать]

  Лечению хронических бронхитов с непрерывно рецедивирующим течением подвергалось 11 пациентов в возрасте от 14 до 70 лет. Водный настой пятилистника (10%) применялся в фазе затухающего обострения по 100 - 150 мл 2 раза в день натощак в течение 5 и более месяцев. В результате лечения уменьшилась частота заболеваемости острыми респираторными вирусными инфекциями, гриппом. У больных исчезала одышка, купировался кашель, уменьшалась потливость, слабость. У всех больных в результате лечения в мокроте при бактериологическом обследовании отсутствовал стафилококк, клебсиеллы, кандиды (работа выполнена в МСЧ № 168, фитотерапевтом Л.Ф. Налепо).

• Лечение поливалентного аллергоза [показать]

  Лечение поливалентного аллергоза с преимущественным поражением кожи, является одной из сложнейших задач фармакотерапии.

  Под наблюдением находилось 55 детей в возрасте от 1 до 14 лет. Пятилистник кустарниковый в виде 5% водного настоя назначался длительными курсами по 10-50 мл 4 раза в день за полчаса до еды. Одновременно проводили лечение водными отварами пятилистника в форме ванн в режиме от 1 раза в неделю до ежедневных, в зависимости от выраженности и характера кожных высыпаний.

  Из находившихся на лечении детей у 10 аллергическое поражение кожи исчезло полностью и не возникало в последующем в течение 2-4 лет наблюдения, у 41 ребенка значительно уменьшилось или исчезло, но периодически повторялось с такой же положительной реакцией на лечение пятилистником кустарниковым (фитотерапевт Л.Ф. Налепо).

Таким образом, можно сформулировать, на основании выполненных экспериментальных, клинических исследований, а также сведений, полученных из источников народной медицины, показания к применению пятилистника кустарникового:

• хронический энтероколит с дисбактериозом кишечной флоры;
• хронические бронхиты с нарушением вентиляции преимущественно по рестриктивному типу, непрерывно рецидивирующее течение;
• поливалентный аллергоз с преимущественным поражением кожных покровов, вторичный иммунодефицит.

Содержание:

• Введение в микронутриентологию. Проф. Гичев Ю.П.
• Общие представления о биологической и фармакологической активности микронутриентов. Проф. Гичев Ю.П., Гичев Ю.Ю.
• Методологические основы и лечебно-профилактическое значение использования препаратов ENRICH в программах оздоровления населения. Д-р МакКосланд К., д-р Оганова Э.
• Новые аспекты фармакологического действия оригинальных полифенольных комплексов, выделенных из растительной флоры Сибири и Алтайского края. Проф. Грек О.Р.
• Механизмы влияния микронутриентов на иммунную систему. Член-корр. РАМН Трунова Л.А.
• Биохимические механизмы онкопротективного действия растительных индолов и изотиоцианатов. Проф. Дадали В.А.
• Биохимические аспекты действия на организм минеральных компонентов пищи. Цинк, селен. Проф. В.А. Дадали